Chronic Cystoisospora belli infection in a Colombian patient living with HIV and poor adherence to highly active antiretroviral therapy / Infección crónica por Cystoisospora belli en un paciente colombiano con HIV y cumplimiento deficiente de la terapia antirretroviral de gran actividad

Abstract | Cystoisospora belli is an intestinal Apicomplexan parasite associated with diarrheal illness and disseminated infections in humans, mainly immunocompromised individuals such as those living with the human immunodeficiency virus (HIV) or acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). An irregular administration of highly active antiretroviral therapy (HAART) in HIV patients may increase the risk of opportunistic infections like cystoisosporiasis. We describe here a case of C. belli infection in a Colombian HIV patient with chronic gastrointestinal syndrome and poor adherence to HAART. His clinical and parasitological cure was achieved with trimethoprim-sulfamethoxazole treatment. Although a reduction in the number of C. belli cases has been observed since the use of HAART, this parasite still has to be considered as a differential diagnosis of diarrheal disease in HIV/AIDS patients. Effective interventions enhancing adherence to HAART should be included in HIV patient care programs.

Resumen | Cystoisospora belli es un parásito intestinal del filo Apicomplexa asociado con enfermedades diarreicas e infecciones diseminadas en humanos, principalmente en individuos inmunocomprometidos, como aquellos infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) o el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (sida). El cumplimiento inadecuado de la terapia antirretroviral de gran actividad (TARGA) puede aumentar el riego de infecciones oportunistas, incluida la cistoisosporiasis. Se describe el caso de infección por C. belli en un paciente colombiano con HIV, que presentó un síndrome gastrointestinal crónico e incumplía el tratamiento con la TARGA. Después del diagnóstico parasitológico, el paciente fue tratado con trimetoprim-sulfametoxazol, lográndose la recuperación clínica y la cura parasitológica. Aunque se ha observado una reducción en el número de casos de C. belli desde la implementación de la TARGA, este parásito aún debe considerarse en el diagnóstico diferencial de las enfermedades diarreicas en pacientes con HIV/sida. Los programas de atención deben incluir intervenciones efectivas que potencien el cumplimiento de la TARGA en estos pacientes.

Molecular detection of Apicomplexa protozoa in tissues from Alouatta guariba clamitans / Detecção molecular de protozoários Apicomplexa em tecidos de Alouatta guariba clamitans

The brown howler monkey (Alouatta guariba clamitans) is a primate species widely distributed in South America. Infections by protozoa are common in primates. However, studies on protozoa in primates in Brazil are scarce, so the goal of this study was to investigate DNA from the apicomplexan protozoa Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii in tissues of A. guariba clamitans. DNA extraction was performed on tissue samples from the heart, brain, liver, spleen, lung and intestine of six A. guariba clamitans from Santa Maria, Central Region of Rio Grande do Sul, Brazil. Conventional PCR was performed using 18S rRNA gene general primers for Apicomplexa and also specific primers to amplify Neosporaspp. and Toxoplasma gondii DNA. All animals were positive in the 18S PCR and the genetic sequencing confirmed the presence of Sarcocystis spp. DNA in the tissues of four animals belonging to at least two species (S. neurona and S. gigantea) and T. gondii DNA in the other two animals. One positive sample for T. gondii was genotypically characterized as atypical by the restriction fragment length polymorphism technique. N. caninum DNA was not detected in the tested samples. The presence of Apicomplexa protozoan DNA in the tissues of the six animals tested in this study highlights the importance of howler monkeys as maintainers of these pathogens in nature.(AU)

O bugio ruivo (Alouatta guariba clamitans) é uma espécie de primata amplamente distribuída na América do Sul. As infecções por protozoários são comuns em primatas. Entretanto, estudos sobre protozoários em primatas no Brasil são escassos, portanto o objetivo deste estudo foi pesquisar DNA dos protozoários Apicomplexa Neospora caninum, Sarcocystisspp. e Toxoplasma gondii em tecidos de A. guariba clamitans. A extração de DNA foi realizada em amostras de tecido do coração, cérebro, fígado, baço, pulmão e intestino de seis A. guariba clamitans oriundos de Santa Maria, Região Central do Rio Grande do Sul, Brasil. Foi realizada PCR convencional utilizando primers geral do gene 18S rRNA para Apicomplexa e também primers específicos para amplificação de DNA de Neospora spp.e Toxoplasma gondii. Todos os animais foram positivos no PCR geral para Apicomplexa e no sequenciamento genético confirmou-se a presença de DNA de Sarcocystis nos tecidos de quatro animais pertencentes a pelo menos duas espécies (S. neurona e S. gigantea), e DNA de T. gondii foi detectado nos outros dois animais. Uma amostra positiva para T. gondii foi caracterizada genotipicamente como atípico pela técnica de polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição. Não foi detectado DNA de N. caninum nas amostras testadas. A presença de DNA de protozoários apicomplexa nos tecidos dos seis animais testados neste estudo destaca a importância dos bugios ruivos como mantenedores desses patógenos na natureza.(AU)

Hepatozoon pyramidumi sp. n. (Apicomplexa: Adeleorina) from the blood of Echis pyramidum: morphology and SSU rDNA sequence / Hepatozoon pyramidumi sp. n. (Apicomplexa: Adeleorina) do sangue de Echis pyramidum: morfologia e sequência de SSU rDNA

Abstract Hepatozoon pyramidumi sp. n. is described from the blood of the Egyptian saw-scaled viper, Echis pyramidum, captured from Saudi Arabia. Five out of ten viper specimens examined (50%) were found infected with Hepatozoon pyramidumi sp. n. with parasitaemia level ranged from 20-30%. The infection was restricted only to the erythrocytes. Two morphologically different forms of intraerythrocytic stages were observed; small and mature gamonts. The small ganomt with average size of 10.7 × 3.5 μm. Mature gamont was sausage-shaped with recurved poles measuring 16.3 × 4.2 μm in average size. Infected erythrocytes were hypertrophied; their nuclei were deformed and sometimes displaced from their central position in the normal uninfected cell. Merogonic stages were observed in the lung endothelial cell and the liver parenchyma cells. Mature meront was 17.8 × 13.6 µm and contained banana-shaped merozoites with average size of ~15 × 2 µm. Phylogenetic analysis based on the SSU rDNA sequence clustered Hepatozoon pyramidumi sp. n with previously sequenced Hepatozoon spp., most of them infected reptilian hosts without geographic consideration. The morphological and molecular comparison with closely related species proved the taxonomic uniqueness and novelty of the present form.

Resumo Hepatozoon pyramidumi sp. n. é descrito a partir do sangue da víbora em escamas e quilhas serrilhadas, Echis pyramidum, capturada na Arábia Saudita. Cinco de dez espécimes de víbora examinadas (50%) foram encontradas infectadas com Hepatozoon pyramidumi sp. n. com nível de parasitemia de 20% a 30%. A infecção foi restrita apenas aos eritrócitos. Foram observadas duas formas morfologicamente diferentes de estágios intra-eritrocíticos: gamontes de tamanho pequeno e madura. As formas menores de gamontes apresentaram média de 10,7 × 3,5 μm. Os gamontes maduros apresentaram forma de salsicha, com pequenos polos recurvados, medindo 16,3 × 4,2 μm, em média. Os eritrócitos infectados estavam aumentados de tamanho; seus núcleos encontravam-se deformados e, algumas vezes, deslocados de sua posição central, quando comparados às células normais não-infectadas. Foram observados estágios merogônicos em células endoteliais pulmonares e nas células do parênquima hepático. Os merontes maduros apresentavam 17,8 × 13,6 µm e continham merozoítos em forma de banana com tamanho médio de ~ 15 × 2 µm. A análise filogenética baseada nas sequências SSU rDNA agrupou Hepatozoon pyramidumi sp. n com Hepatozoon spp. detectados em répteis de várias regiões geográficas. Por meio de análises morfológicas e moleculares com espécies intimamente relacionadas, demonstrou-se a singularidade dessa nova espécie de Hepatozoon.

First molecular detection of Haemoproteus spp. and Plasmodium spp. in eared doves (Zenaida auriculata) in Brazil / Primeira detecção molecular de Haemoproteus spp. e Plasmodium spp. em pombos (Zenaida auriculata) no Brasil

Abstract The aim of this study was to verify the presence and identify the species of haemosporidian parasites in eared doves (Zenaida auriculata) in Brazil. Two hundred and eleven male and female eared doves were trap-captured in four different regions of Londrina city, in southern Brazil. Whole blood was collected in EDTA tubes through heart puncture after euthanasia in a CO2 chamber. A nested PCR targeting the mitochondrial cytochrome b gene (cyt b) of Haemoproteus spp./Plasmodium spp. was performed, followed by an enzymatic digestion to identify the genus. Phylogenetic trees were constructed to determine the closely related species. Out of 211 eared doves, 209 (99.05%) were positive for Haemoproteus spp. and/or Plasmodium spp. RFLP analysis showed that 72.72% (152/209) of eared doves were positive only for Haemoproteus spp., 6.22% (13/209) were positive only for Plasmodium spp., and 21.05% (44/209) of eared doves had mixed infections. Genetic analysis found four samples that were homologous with Haemoproteus multipigmentatus and one that was homologous with Plasmodium sp. This is the first molecular study of hemoparasites from eared doves in Brazil, and it is also the first description of H. multipigmentatus and Plasmodium spp. infection in eared doves in Brazil.

Resumo O objetivo deste estudo foi verificar a presença e a identificação espécies de parasitas hemosporídeos em pombos (Zenaida auriculata) no Brasil. Duzentos e onze pombos machos e fêmeas foram capturados em quatro regiões diferentes de Londrina, sul do Brasil. Amostra de sangue foi coletada em tubos contendo EDTA por meio de punção cardíaca, após eutanásia em câmara de CO2. Uma nested PCR com alvo no gene mitocondrial citocromo b (cyt b) de Haemoproteus spp./Plasmodium spp. foi realizada, seguida de digestão enzimática para identificar o gênero. A árvore filogenética foi construída para determinar a relação com outras espécies. Das 211 pombas, 209 (99,05%) foram positivas para Haemoproteus spp./Plasmodium spp. A análise RFLP demonstrou que 72,72% (152/209) das pombas foram positivas somente para Haemoproteus spp.; 6,22% (13/209) foram positivas somente para Plasmodium e 21,05% (44/209) das pombas tiveram infecções mistas. A análise genética mostrou quatro amostras homólogas com H. multipigmentatus e uma com Plasmodium spp. Este é o primeiro estudo molecular de hemoparasitas em pombos no Brasil. E é também a primeira descrição da infecção por H. multipigmentatus e Plasmodium spp. em pombos Z. auriculata no Brasil.

Hepatozoon sp. gamonts as an accidental finding in synovial liquid from an injured maned wolf (Chrysocyon brachyurus) in southeastern Brazil / Gamontes de Hepatozoon sp. como achado acidental em líquido sinovial de lobo guará (Chrysocyon brachyurus) no sudeste do Brasil

Abstract A free-living, adult male maned wolf (Chrysocyon brachyurus) was referred to the Governador "Laudo Natel" - FCAV/Unesp veterinary hospital after being found with skin lesions and a fracture on the right pelvic limb, which had to be amputated due to compromised integrity. Around 20 days later, bilateral accentuated swollen on humerus-radius-ulna articulation was observed. The synovial liquid was drained and sent to the laboratory for synovial cytology with Rosenfeld staining that revealed predominantly degenerated neutrophils with karyolytic chromatin associated with intracellular inclusions suggestive of Hepatozoon sp. gametocytes. Blood and synovial liquid samples were submitted to molecular analysis, aiming to amplify the Hepatozoon spp. 18S rRNA gene fragment. Despite the positioning of the found Hepatozoon sequence together with Hepatozoon canis previously detected in domestic carnivores, the BLAST analysis showed only 98% identity with H. canis. To the best of the authors' knowledge, this is the first time a Hepatozoon was detected in the synovial liquid by clinical pathology and molecular analyses.

Resumo Um lobo guará (Chrysocyon brachyurus) adulto, macho, de vida livre foi encaminhado para atendimento no hospital veterinário Governador "Laudo Natel" - FCAV/Unesp após ser encontrado com lesões de pele e fratura em membro pélvico direito, sendo amputado devido a comprometimento da integridade do membro. Aproximadamente 20 dias após a chegada ao hospital, foi notado acentuado aumento de volume bilateral em região de articulação úmero-rádio-ulnar. O líquido sinovial foi drenado e enviado para análise citológica com coloração de Rosenfeld, revelando a presença de neutrófilos degenerados com cromatina cariolítica associados a inclusões intracelulares sugestivas de gametócitos de Hepatozoon sp. Amostras de sangue e líquido sinovial foram submetidas a análises moleculares visando amplificar um fragmento do gene 18S rRNA de Hepatozoon spp. Apesar da sequência de Hepatozoon detectada se posicionar filogeneticamente no mesmo clado que H. canis previamente detectado em carnívoros domésticos, o resultado da análise do BLAST mostrou somente 98% de identidade com H. canis. De acordo com o conhecimento dos autores, esta é a primeira vez que Hepatozoon foi detectado no líquido sinovial por meio de patologia clínica e análises moleculares.

Primeira descrição de pseudoparasitismo por esporocistos de Monocystis sp. em tatu-galinha, Dasypus novemcinctus (Linnaeus, 1758) - relato de caso / First description of pseudoparasitism by sporocysts of Monocystis sp. in nine banded armadillo, Dasypus novemcinctus (Linnaeus, 1758) - case report

O presente artigo é um relato sobre uma fêmea de D. novemcinctus que foi capturada de forma imprevista, durante um projeto de avaliação sanitária de animais silvestres sinantrópicos do município de Toledo/PR (autorização Sisbio/Ibama n. 55109-1). Durante a avaliação física, amostras de fezes foram coletadas após defecação espontânea e encaminhadas para análise. O material foi submetido aos métodos de flutuação simples em solução hipersaturada de cloreto de sódio e centrífugo-flutuação em sacarose. Na leitura das lâminas obtidas pelo método de centrífugo-flutuação em sacarose, foram observadas estruturas com comprimento de aproximadamente 10µm, forma bicônica e um tampão em cada extremidade, compatíveis com esporocistos de Monocystis sp. Protozoários do filo Apicomplexa, os Monocystis sp., são geralmente parasitas de anelídeos, como as minhocas. Esse organismo é comumente correlato a pseudoparasitismo em vários animais, porém não foram encontrados relatos de pseudoparasitismo desse agente em tatus-galinhas, logo essa é a primeira descrição de Monocystis sp. em espécime de D. novemcinctus.(AU)

The present article is an account of a female of D. novemcinctus which was captured during a sanitary evaluation project of synanthropic wild animals of the municipality of Toledo/PR (license SISBIO/ICMBIO n°. 55109-1). During a physical evaluation, samples of feces were collected, after spontaneous defecation, and sent for analysis. The material was subjected to simple flotation methods in hypersaturated sodium chloride solution and centrifugal-flotation solutions in sucrose. In a test reading by the centrifugal-flotation method in sucrose, structures with approximately 10µm, biconical shape and one plate at each end were observed, compatible with sporocysts of Monocystis sp. Protozoa of the phylum Apicomplexa, like Monocystis sp., it is common parasitic annelids, such as worms. This organism is a correlate of pseudoparasitism in several animals but was not found to describe this product as an agent in nine banded armadillos, so this is a first description of Monocystis sp. in specimen of D. novemcinctus.(AU)

Ultrastructure of phagocytes and oocysts of Nematopsis sp. (Apicomplexa, Porosporidae) infecting Crassostrea rhizophorae in Northeastern Brazil / Ultraestrutura de fagócitos e oocistos de Nematopsis sp. (Apicomplexa, Porosporidae) infectando Crassostrea rhizophorae no Nordeste brasileiro

Abstract This work describes the detailed ultrastructural morphology of the phagocyte imprisoning an oyster of Nematopsis (Apicomplexa) found in Crassostrea rhizophorae, in the city of Maceió (AL), Brazil. The highly infected hosts had half-open leaflets with weak, slow retraction of the adductor muscles. Variable number of ellipsoid oocytes, either isolated and or clustered, was found between myofibrils of the adductor muscle. Each oocyst was incarcerated in a parasitophorous vacuole of host uninucleated phagocyte. The oocysts were composed of a dense wall containing a uninucleate vermiform sporozoite. The wall of the fine oocysts was composed of homogeneous electron-lucent material formed by three layers of equal thickness, having a circular orifice-micropyle obstructed by the operculum. The oocysts presented ellipsoid morphology with their wall was surrounded by a complex network of numerous microfibrils. Important details of the taxonomic value were visualized such as the ultrastructural organization of the oocyst wall and the organization of the micropyle and operculum, beyond the microfibrils that protrude from the oocyst wall only observed by transmission electron microscopy (TEM) and that may aid in the identification of the species. However, in order to clarify the systematic position of the species reported of the genus Nematopsis, it is important to proceed with genetic analyses.

Resumo Este trabalho descreve a morfologia ultraestrutural detalhada do fagócito encarcerando um oocisto de Nematopsis (Apicomplexa) encontrado em Crassostrea rhizophorae, na cidade de Maceió (AL), Brasil. Os hospedeiros muito infectados apresentavam valvas entreabertas com retração fraca e lenta dos músculos abdutores. Número variável de oócitos de forma elipsoide, isolados e ou agrupados foi encontrado entre as miofibrilas do músculo abdutor. Cada oocisto estava encarcerado num vacúolo parasitóforo do fagócito uninucleado do hospedeiro. Os oocistos eram compostos por uma parede densa contendo um esporozoíto vermiforme uninucleado. A parede dos oocistos finos era composta de material electron-lucente homogêneo formado por três camadas de espessura igual, possuindo um orifício circular - micrópila, obstruída pelo opérculo. Os oocistos apresentavam morfologia elipsoide, sua parede era circundada por uma complexa rede de numerosas microfibrilas. Detalhes de valor taxonômico importantes foram visualizados tais como: a organização ultraestrutural da parede do oocisto e a organização da micrópila e do opérculo, além das microfibrilas que se projetam da parede do oocisto, estrutura apenas observada em microscopia eletrônica de transmissão (MET) e que pode auxiliar na identificação da espécie. Contudo, para esclarecer a posição sistemática da maioria das espécies relatadas do gênero Nematopsis é importante prosseguir com as análises genéticas.

Rhoptry antigens as Toxoplasma gondii vaccine target

Toxoplasmosis is a cosmopolitan zoonotic infection, caused by a unicellular protozoan parasite known as Toxoplasma gondii that belongs to the phylum Apicomplexa. It is estimated that over one-third of the world's population has been exposed and are latently infected with the parasite. In humans, toxoplasmosis is predominantly asymptomatic in immunocompetent persons, while among immunocompromised individuals may be cause severe and progressive complications with poor prognosis. Moreover, seronegative pregnant mothers are other risk groups for acquiring the infection. The life cycle of T. gondii is very complex, indicating the presence of a plurality of antigenic epitopes. Despite of great advances, recognize and construct novel vaccines for prevent and control of toxoplasmosis in both humans and animals is still remains a great challenge for researchers to select potential protein sequences as the ideal antigens. Notably, in several past years, constant efforts of researchers have made considerable advances to elucidate the different aspects of the cell and molecular biology of T. gondii mainly on microneme antigens, dense granule antigens, surface antigens, and rhoptry proteins (ROP). These attempts thereby provided great impetus to the present focus on vaccine development, according to the defined subcellular components of the parasite. Although, currently there is no commercial vaccine for use in humans. Among the main identified T. gondii antigens, ROPs appear as a putative vaccine candidate that are vital for invasion procedure as well as survival within host cells. Overall, it is estimated that they occupy about 1%–30% of the total parasite cell volume. In this review, we have summarized the recent progress of ROP-based vaccine development through various strategies from DNA vaccines, epitope or multi epitope-based vaccines, recombinant protein vaccines to vaccines based on live-attenuated vectors and prime-boost strategies in different mouse models.

Rangelia vitalii infection in a dog from São Paulo city, Brazil: case report / Infecção por Rangelia vitalli em cão da zona norte de São Paulo/SP: relato de caso

Canine rangeliosis is an extravascular hemolytic disease caused by the protozoan Rangelia vitalii, which is transmitted by ticks of the species Amblyomma aureolatum. The most common clinical signs are apathy, hyperthermia and spontaneous bleeding. Anemia and thrombocytopenia are the most common hematological findings. This work reports a clinical case of canine Rangeliosis treated at a private veterinary hospital, in São Paulo city in 2017. A dog was treated at a veterinary hospital in the north of São Paulo, with progressive weight loss, apathy and tail injury. Anemia and thrombocytopenia were observed on the hemogram. Rangelia vitalii DNA was detected in animal blood by real-time PCR (qPCR). In addition to the supportive treatment, doxycycline and subcutaneous imidocarb applications were used. The sample collected after treatment with the antibiotic continued to present protozoal DNA. The disease should be considered as a differential diagnosis and there is a great need for further studies about the therapy used.(AU)

A rangeliose canina é uma doença hemolítica extravascular causada pelo protozoário Rangelia vitalii, o qual é transmitido por carrapatos da espécie Amblyomma aureolatum. Os sinais clínicos mais comuns são apatia, hipertermia e sangramentos espontâneos. Os achados hematológicos mais comuns são anemia e trombocitopenia. Este trabalho teve como objetivo relatar um caso clínico de Rangeliose canina tratada em um hospital veterinário particular, na cidade de São Paulo no ano de 2017. Um cão foi atendido em um hospital veterinário da zona norte de São Paulo, com emagrecimento progressivo, apatia e lesão na cauda. No hemograma foram observadas anemia e trombocitopenia. Através da PCR em tempo real (qPCR) do sangue do animal constatou-se a presença de DNA de Rangelia vitalii. Além do tratamento de suporte, utilizou-se doxiciclina e aplicações subcutâneas de imidocarb. A amostra coletada após o tratamento com o antibiótico continuou apresentando DNA do protozoário. A enfermidade deve ser considerada como diagnóstico diferencial e há uma grande necessidade de maiores estudos acerca da terapia utilizada.(AU)

Parasitism by Nematopsis sp. (Apicomplexa: Eugregarinida) in Mytella guyanensis at the Marine Extractive Reserve Baía do Iguape, Bahia, Brazil / Parasitismo por Nematopsis sp. (Apicomplexa: Eugregarinida) em Mytella guyanensis na Reserva Extrativista Marinha Baía do Iguape, Bahia, Brasil

Several studies show the presence of protozoa of the genus Nematopsis Schneider, 1892, in many species of bivalves. The pathogenicity of this Apicomplexa is still much debated, which is possibly related to the parasitism degree and host habitat. In this context, this study investigated parasitism by Nematopsis sp. in Mytella guyanensis (Bivalvia: Mytilidae) in a mangrove of the Marine Extractive Reserve Baía do Iguape, Bahia, Brazil. The collections were made monthly, from March 2014 to March 2015, consisting of 30 adults with shell height above 40 mm per month, totaling 360 specimens. The specimens were measured, weighed, opened, and macroscopically examined for identifying parasites and/or signs of morphological changes. After that, they were fixed in Davidson's solution and processed according to classical histological techniques, with inclusion in paraffin, obtaining 5 µm-thick sections by microtomy, and stained by Harris' Hematoxylin and Eosin (HE). The water temperature ranged from 25.5 to 33.6 ºC and the salinity from 21.1 to 34.3 Practical Salinity Units (PSU). The specimens measured between 41.1 and 68.6 mm and had an average weight of 7.24 g. Macroscopically, there was no presence of the parasite or any morphological changes related its presence. The frequency percentage of Nematopsis sp. was 99.45%. The mantle was the organ with the highest frequency of infection (46.26%), followed by the gonads (18.36%). Among the analyzed organs, all presented the parasite and, in a few severely infected cases, microscopical changes were observed in the mantle conformation. The infection intensity for most of the sessions analyzed was 1 to 3 oocysts/phagocyte; however, in one of the sessions, 9 oocysts/phagocytes were recorded. The parasite had a negative correlation with salinity. The high frequency of Nematopsis sp. should be considered for the sustainability of natural stocks, especially if such parasitism occurs simultaneously with other pathogens and stressful environmental conditions.(AU)

Diversos estudos evidenciam a presença de protozoários do gênero Nematopsis Schneider, 1892 em várias espécies de bivalves. A patogenicidade desse apicomplexo ainda é bastante debatida, a qual possivelmente relaciona-se ao grau de parasitismo e habitat do hospedeiro. Nesse contexto, este estudo investigou o parasitismo por Nematopsis sp. em Mytellaguyanensis(Bivalvia: Mytilidae) em um manguezal da Reserva Extrativista Marinha Baía do Iguape, Bahia, Brasil. As coletas foram efetuadas mensalmente, de março de 2014 a março de 2015, constando 30 adultos com altura da concha acima de 40 mm, totalizando 360 espécimens. Os espécimens foram medidos, pesados, abertos e examinados macroscopicamente para a identificação de parasitos e/ou sinais de alterações morfológicas, em seguida fixados em solução de Davidson e processados segundo técnica histológica clássica, com inclusão em parafina, obtenção de cortes de 5 µm de espessura por microtomia e coloração por hematoxilina de Harris e Eosina (HE). A temperatura da água variou de 25,5 a 33,6 ºC e a salinidade de 21,1 a 34,3 Unidades Práticas de Salinidade (UPS). Os espécimens mediram entre 41,1 e 68,6 mm e tiveram um peso médio de 7,24g. Macroscopicamente, não se observou presença do parasito ou qualquer alteração morfológica relacionada à presença do mesmo. A frequência percentual de Nematopsis sp. foi de 99,45%. O manto foi o órgão de maior frequência de infecção (46,26%), seguido das gônadas (18,36%). Entre os órgãos analisados, todos apresentaram o parasito, sendo que, para poucos casos severamente infectados, observaram-se microscopicamente modificações na conformação do manto. A intensidade de infecção para a maioria das sessões analisadas foi de 1 a 3 oocistos/fagócitos, contudo em uma das sessões foram registrados 9 oocistos/fagócitos. O parasito apresentou correlação negativa com a salinidade. A elevada frequência do Nematopsis sp. deve ser levada em consideração para a sustentabilidade dos estoques naturais, principalmente se tal parasitismo ocorrer simultaneamente a outros patógenos e condições ambientais estressantes.(AU)

Calcium-dependent protein kinases are potential targets for Toxoplasma gondii vaccine

Toxoplasma gondii belongs to the Apicomplexa phylum that caused a widespread zoonotic infection in wide range of intermediate hosts. Over one-third of the world's population are latently infected with T. gondii and carry it. The complex life cycle of T. gondii indicates the presence of a plurality of antigenic epitopes. During the recent years, continuous efforts of scientists have made precious advances to elucidate the different aspects of the cell and molecular biology of T. gondii. Despite of great progresses, the development of vaccine candidates for preventing of T. gondii infection in men and animals is still remains a challenge. The calcium-dependent protein kinases (CDPKs) belongs to the superfamily of kinases, which restricted to the apicomplexans, ciliates, and plants. It has been documented that they contribute several functions in the life cycle of T. gondii such as gliding motility, cell invasion, and egress as well as some other critical developmental processes. In current paper, we reviewed the recent progress concerning the development of CDPK-based vaccines against acute and chronic T. gondii.

Hepatozoon caimani in Caiman crocodilus yacare (Crocodylia, Alligatoridae) from North Pantanal, Brazil / Hepatozoon caimani em Caiman crocodilus yacare (Crocodylia, Alligatoridae) do Norte do Pantanal, Brasil

Abstract Hepatozoon species are the most common intracellular hemoparasite found in reptiles. Hepatozoon caimani, whose vectors are Culex mosquitoes, has been detected in a high prevalence among caimans in Brazil by blood smears examinations. The present work aimed to detect and characterize the Hepatozoon spp. found in 33 caimans (24 free-ranging and 9 captive; 28 males and 5 females) (Caiman crocodilus yacare) sampled at Poconé, North Pantanal, state of Mato Grosso, Brazil, using blood smears examinations and molecular techniques. Hepatozoon spp.-gametocytes were found in 70.8% (17/24) and 88.8% (8/9) of blood smears from free-ranging and captive caimans, respectively. Hepatozoon spp. 18S rRNA DNA was found in 79.2% (19/24) and 88.8% (8/9) of free-ranging and captive caimans, respectively. Comparative analysis of parasitized and non-parasitized erythrocytes showed that all analyzed features were significantly different (P<0.05) for both linear and area dimensions. Phylogenetic analysis based on 18S rRNA sequences grouped the Hepatozoon spp. sequences detected in the present study together with H. caimani, recently detected in caimans in southern Pantanal.

Resumo Espécies do gênero Hepatozoon são os hemoparasitas intracelulares mais comumente encontrados em répteis. Hepatozoon caimani, cujos vetores são mosquitos do gênero Culex sp., têm sido detectados em uma alta prevalência entre jacarés no Brasil, por meio da análise de esfregaços sanguíneos. O presente estudo objetivou detectar e caracterizar parasitas do gênero Hepatozoon spp. em 33 jacarés (24 de vida-livre e 9 de cativeiro; 28 machos e 5 fêmeas) (Caiman crocodilus yacare) amostrados em Poconé, região norte do Pantanal, estado do Mato Grosso, Brasil, por meio da análise de esfregaços sanguíneos e técnicas moleculares. Gametócitos de Hepatozoon spp. foram encontrados em 70,8% (17/24) e em 88,8% (8/9) dos esfregaços sanguíneos de jacarés de via-livre e cativeiro, respectivamente. 18S rRNA DNA de Hepatozoon spp. foi detectado em 79,2% (19/24) e 88,8% (8/9) das amostras de sangue de jacarés de vida-livre e cativeiro, respectivamente. A análise comparativa de eritrócitos parasitados e não parasitados mostrou diferença significativa (P<0,05) em todas as variáveis lineares e de área analisadas. A análise filogenética baseada em sequências de DNA do 18S rRNA agrupou as sequências de Hepatozoon spp. detectadas no presente estudo juntamente com aquelas de H. caimani, recentemente detectadas em jacarés do Pantanal do Mato Grosso do Sul.

Ascogregarina taiwanensis infection in Aedes aegypti and Aedes albopictus in Santa Catarina, South Brazil

Abstract INTRODUCTION This study registers Ascogregarina spp. infection in field populations of Aedes aegypti and Aedes albopictus in a subtropical region of Brazil. METHODS Mosquito larvae collected in tires placed in four municipalities of Santa Catarina were identified morphologically and assessed for Ascogregarina sp. infection using morphological and molecular methods. RESULTS Both mosquito species harbored Ascogregarina taiwanensis, whose genomic DNA was confirmed in both the Aedes species by PCR. DNA sequences were deposited in GenBank. Conclusion: Both Ae. albopictus e Ae. aegypti harbor Ascogregarina sp.

Antibodies against Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii detected in buffaloes from Rio Grande do Sul, Brazil / Anticorpos contra Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii detectados em búfalos no Rio Grande do Sul

The presence of antibodies against Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii was evaluated in buffaloes (Bubalus bubalis) from Rio Grande do Sul state (RS), southern Brazil. Serum samples (n=220) were analyzed for antibodies by indirect fluorescent antibody test (IFAT). Antibody presence was considered when the titers were equal or higher than 100 for these protozoa. A total of 60.5% (133/220) buffalo serum samples were positive for at least one of the protozoa evaluated in this study. Antibodies for N. caninum, Sarcocystis spp. and T. gondii were found in 36.4% (80/220), 25.5% (56/220) and 16.8% (37/220) of the buffaloes respectively, indicating a higher frequency of N. caninum infection (p=0.0133). The IFAT is a suitable method to diagnose N. caninum, Sarcocystis spp. and T. gondii infection in buffaloes for detecting IgG antibodies. This study demonstrates the presence of these three protozoa in buffalo herds in RS, Brazil, which may be source of infection to other animals. The high frequency of animals positive for N. caninum is important and could be related to reproductive problems. Additionally, the presence of Sarcocystis spp. and T. gondii in buffaloes can be a possible public health issue.(AU)

A presença de anticorpos contra Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii foi avaliada em búfalos (Bubalus bubalis) no estado do Rio Grande do Sul (RS), Região Sul do Brasil. Amostras de soro de 220 bubalinos foi analisada para presença de anticorpos, através de reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram títulos de anticorpos maiores ou iguais a 100, para os protozoários estudados. Um total de 60,5% (133/220) das amostras sorológicas dos búfalos foram positivas para pelo menos um dos parasitas pesquisados. Anticorpos para N. caninum, Sarcocystis spp. e T. gondii foram encontrados em 36,4% (80/220); 25,5% (56/220) e 16,8% (37/220) dos búfalos respectivamente, indicando que houve uma maior frequência de infecção de N. caninum em relação aos demais protozoários (p=0.0133). A RIFI é um método adequado para o diagnóstico sorológico da infecção por N. caninum, Sarcocystis spp. e T. gondii em búfalos. Este estudo demonstrou a presença destes três protozoários em bubalinos no RS, Brasil, que pode ser fonte de infecção para outros animais. A elevada ocorrência de animais positivos para N. caninum é importante e pode estar relacionada a problemas reprodutivos. Adicionalmente, a presença de Sarcocystis spp. e T. gondii em búfalos, pode significar um possível problema de saúde pública.(AU)

Epizootiology of Perkinsus sp. inCrassostrea gasar oysters in polyculture with shrimps in northeastern Brazil / Epizootiologia de Perkinsus sp. em ostrasCrassostrea gasar em policultivo com camarões no Nordeste do Brasil

Abstract Bivalve culture is of considerable economic and social interest in northeastern (NE) Brazil. The polyculture is an alternative approach to traditional monoculture for reducing the environmental impact of shrimp farming and improving oyster culture. Perkinsus marinus andPerkinsus olseni were found infecting oysters in NE Brazil and can threaten oyster production. This study evaluatedPerkinsus spp. occurrence in Crassostrea gasar during all production stages. Oyster spats were produced in a hatchery and grown in shrimp ponds in Rio Grande do Norte state.Perkinsus spp. were surveyed by Ray’s fluid thioglycollate medium and confirmed by polymerase chain reaction. Prevalence and intensity of infection were determined in oysters until they reached 7 cm. Results showed that the broodstock was already infected by Perkinsus (60%), but the derived spats were Perkinsus-free. Oyster spats acquired Perkinsus infection when transferred to ponds. The prevalence gradually increased in the seven months following placement in ponds (73%), and then decreased to 17% by the tenth month. The infections were initially mild, but intensity increased at the final growth stage. In conclusion, it is possible to produce Perkinsus-free C. gasar oyster spats from infected broodstock, and their culture in shrimp ponds is feasible.

Resumo O cultivo de bivalves é de grande interesse econômico e social no Nordeste (NE) do Brasil. O policultivo é uma alternativa ao monocultivo tradicional de camarões para reduzir o impacto ambiental e melhorar a produção de ostras.Perkinsus marinus e Perkinsus olseni foram identificados infectando ostras no Nordeste do Brasil e representam uma ameaça a produção de ostras. Este estudo avaliou a ocorrência dePerkinsus spp. em Crassostrea gasardurante todas as fases de produção. Sementes de ostras foram produzidas em laboratório e cultivadas em viveiros de camarão no Rio Grande do Norte.Perkinsus spp. foram diagnosticados ​​com o uso do meio de tioglicolato fluido de Ray e confirmado por reação em cadeia da polimerase. A prevalência e intensidade de infecção foram determinadas em ostras até atingirem 7 cm. Os resultados mostraram que os reprodutores encontravam-se infectados porPerkinsus (60%), mas as sementes produzidas estavam livres de Perkinsus. As sementes adquiriram a infecção porPerkinsus quando transferidas para os viveiros. A prevalência aumentou gradualmente nos sete meses após a colocação nos viveiros (73%) e, em seguida, diminuiu para 17% até o décimo mês. As infecções foram inicialmente leves, mas aumentaram até a fase final do crescimento. Em conclusão, é possível produzir sementes de ostras C. gasarlivres de Perkinsus a partir de reprodutores infectados e seu cultivo em viveiros de camarão é viável.

Investigação de anticorpos contra Sarcocystis neurona e Sarcocystis cruzi em equinos / Investigation of antibodies against Sarcocystis neurona and Sarcocystis cruzi in equines

Sarcocystis neurona is the primary agent for Equine Protozoal Myeloencephalitis (EPM), important neurological disease characterized by behavior or muscular changes, that impairs animal performance and husbandry. Sarcocystis cruzi is a pathogen related to myositis in cattle. Although related the life cycles of the parasites are distinct. S. neurona has opossums (Didelphis spp.) and S. cruzi, dogs as definitive hosts. However, S. neurona and S. cruzi may undergo cross-reactivity in serological tests, interfering on results of EPM ante-mortem diagnostic tests. In the present study, serology of 189 mares was performed by indirect immunofluorescence antibody test, using antigens of S. neurona and S. cruzi in order to assess the exposure degree of animals to antigens. Analyzing the results, it was observed that most of the animals (84.13%) reacted with at least one protozoal species and the number of animals which showed antibodies against S. cruzi was greater than S. neurona (80.42% and 33.86%, respectively) and a third of seropositive animals reacted to antigens of both species.(AU)

Molecular identification of Hepatozoon canis in dogs from Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brazil / Identificação molecular de Hepatozoon canis em cães de Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil

The aim of this study was to investigate the occurrence of Hepatozoon species infecting dogs in the municipality of Campo Grande, Mato Grosso do Sul (MS), Brazil, using blood samples (n = 165) drawn from dogs. The species Hepatozoon caniswas identified in 3.63% of the tested animals using molecular tools. Further studies are needed to determine the clinical relevance of this infection and the main arthropod vectors involved in its transmission.

O objetivo deste estudo foi identificar a frequência e espécies de Hepatozoon infectando cães no município de Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil. Uma amostragem de 165 animais foi utilizada e, por meio do uso de ferramentas moleculares, a espécie Hepatozoon canis foi identificada em 3,63% dos animais. Mais estudos são necessários para identificar a relevância clínica e os principais vetores envolvidos na transmissão desse protozoário na região.

Prevalence and parasitemia of Haemogregarina sp. in Podocnemis expansa (Testudines: Podocnemididae) from the Brazilian Amazon / Prevalência e parasitemia de Haemogregarina sp. em Podocnemis expansa (Testudines: Podocnemididae) da Amazônia Brasileira

Seventy-five turtles Podocnemis expansa in the Brazilian Amazon were examined for the presence of ectoparasites and hemoparasites. Samplings were performed in three study areas in the state of Tocantins, Brazil. Twenty-five specimens were sampled per study area (a commercial breeding facility, an indigenous subsistence breeding facility and a wild population of the Javaés River). Hemoparasites of the genus Haemogregarina were found in 66% (50/75) of the turtle specimens, and the infections were restricted to the commercial breeding facility and to the wild population of the Javaés River. The mean level of parasitemia was 54/2,000 erythrocytes (2%). There was no correlation between the body condition index of the chelonians and the level of parasitemia, with no significant difference between genders. No leeches were observed during the physical exams in any of the study areas, but the specimens from the commercial breeding facility were in poor physical condition with shell deformities and the presence of a relatively high amount of skin ulcerations, most likely caused by fungi and bacteria. This was the first study to record the occurrence of hemogregarines on a population scale in P. expansa and helps to increase knowledge about hemoparasites in chelonians in Brazil.

Setenta e cinco tartarugas Podocnemis expansa foram examinadas para a presença de ectoparasitos e hemoparasitos na região amazônica brasileira. As coletas foram realizadas no Estado do Tocantins, Brasil. No estudo foram amostrados 25 indivíduos por local, um criatório comercial, um criatório de subsistência indígena e uma população silvestre do rio Javaés. Foram encontrados hemoparasitos pertencentes ao gênero Haemogregarina em 66% (50/75) dos animais, sendo que as infecções foram restritas ao criatório comercial e a população silvestre do rio Javaés. A parasitemia média foi de 54/2.000 eritrócitos (2%). Não houve relação entre o índice de condição corporal dos quelônios e os níveis de parasitemia e nem diferença quanto ao sexo dos animais. Não foram observadas sanguessugas durante os exames físicos, porém os animais do criatório comercial apresentaram condições físicas ruins com deformidades no casco e presença de uma quantidade relativamente alta de ulcerações na pele, provavelmente causadas por fungos ou bactérias. Este estudo registrou a primeira ocorrência de hemogregarinas em uma escala populacional de P. expansa e contribui para expandir o conhecimento de hemoparasitos em quelônios no Brasil.

Studies on coccidian oocysts (Apicomplexa: Eucoccidiorida) / Estudos sobre oocistos de coccídios (Apicomplexa: Eucoccidiorida)

The oocysts of the coccidia are robust structures, frequently isolated from the feces or urine of their hosts, which provide resistance to mechanical damage and allow the parasites to survive and remain infective for prolonged periods. The diagnosis of coccidiosis, species description and systematics, are all dependent upon characterization of the oocyst. Therefore, this review aimed to the provide a critical overview of the methodologies, advantages and limitations of the currently available morphological, morphometrical and molecular biology based approaches that may be utilized for characterization of these important structures. It has become apparent that no single methodology is sufficient to fully characterize these structures and the majority of researchers favor the use of combinational or polyphasic approaches.

Os oocistos de coccídios são estruturas robustas, frequentemente isoladas das fezes ou urina de seus hospedeiros, os quais oferecem resistência a danos mecânicos e permitem que os parasitas sobrevivam e permaneçam infecciosos por períodos prolongados. O diagnóstico da coccidiose, descrição das espécies e sistemática são dependentes da caracterização do oocisto. Portanto, esta revisão teve como objetivo fornecer uma visão crítica das metodologias, vantagens e limitações dos métodos morfológicos, morfométricos e moleculares que podem ser utilizados para a caracterização destas estruturas importantes. Tornou-se evidente que nenhuma metodologia única é suficiente para caracterizar completamente essas estruturas e que a maioria das pesquisas favorecem o uso de metodologias combinadas ou polifásicas.

Cytauxzoon felis and 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' coinfection in a brazilian domestic cat (Felis catus) / Co-infecção por Cytauxzoon felis e 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' em um gato doméstico (Felis catus) no Brasil

This article describes the first detection of Cytauxzoon felis, using molecular techniques, in a naturally infected domestic cat from Brazil, South America. Coinfection with 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' was also found. The molecular identification of the piroplasmid species was performed by Polymerase Chain Reaction (PCR) and sequencing analysis. A 284 pb fragment of the gene encoding the 18S ribosomal RNA region was amplified and showed 99% identity with other C. felis strains from North America. In addition, PCR-RFLP (restriction fragment length polymorphism) analysis, which amplifies a 595 bp fragment of the gene encoding 16S ribosomal RNA of some bacterial species, identified the co-infecting species as 'Candidatus M. haemominutum'.

Este artigo descreve a primeira detecção de Cytauxzoon felis em um gato doméstico naturalmente infectado no Brasil, América do Sul, através de técnicas moleculares. Também foi encontrada co-infecção com 'Candidatus Mycoplasma haemominutum'. A detecção molecular da espécie do piroplasmídeo foi realizada através da reação em cadeia pela polimerase (PCR) e sequenciamento. Um fragmento de 284 pb do gene codificador da região 18S do RNA ribossomal do parasito foi sequenciada e mostrou 99% de identidade com outros isolados de C. felis da América do Norte. Ademais, através da análise por meio de PCR-RFLP (Polimorfismo no comprimento de fragmentos de restrição), que amplifica um fragmento de 595 pb do gene codificador da porção 16 do RNA ribossomal de algumas espécies de bactérias, concluiu-se que a espécie com-infectante era 'Candidatus M. haemominutum'.